DNase I

DNase I (デオキシリボヌクレアーゼ I) は、一本鎖または二本鎖 DNA を消化できるエンドデオキシリボヌクレアーゼです。ホスホジエステル結合を認識して切断し、5'末端にリン酸基、3'末端にヒドロキシルを持つモノデオキシヌクレオチドまたは一本鎖または二本鎖のオリゴデオキシヌクレオチドを生成します。DNase I の活性は Ca2+ に依存し、Mn2+ や Zn2+ などの二価金属イオンによって活性化されます。5mM Ca2+ が酵素を加水分解から保護します。Mg2+ の存在下では、酵素は DNA 鎖上の任意の部位をランダムに認識して切断することができます。Mn2+ の存在下では、DNA の二本鎖が同時に認識され、ほぼ同じ部位で切断され、1 ～ 2 ヌクレオチドが突き出た平坦末端 DNA 断片または粘着末端 DNA 断片が形成されます。

製品特性

ウシ膵臓 DNase I を酵母発現系で発現させ、精製しました。

Cコンポーネント

輸送と保管

1. 保存安定性: – 15℃~-25℃で保存。

2.輸送の安定性: アイスパックの下で輸送します。

3. 含有: 10 mM Tris-HCl、2 mM CaCl₂、50％グリセロール、25℃でpH 7.6。

単位の定義

1 単位は、37°C​​ で 10 分間に 1 μg の pBR322 DNA を完全に分解する酵素の量として定義されます。

品質管理

RNase:アガロースゲル電気泳動によると、5UのDNase Iと1.6μgのMS2 RNAを37℃で4時間処理しても分解は生じません。

細菌性 エンドトキシン:中国薬局方 IV 2020 版、ゲル限界試験方法、一般規則 (1143) による LAL テスト。細菌のエンドトキシン含有量は 10 EU/mg 以下である必要があります。

使用説明書

1. RNase-free チューブに以下の割合で反応液を調製します。

2.37℃で15分間。

3. ターミネーションバッファーを加えて反応を停止させ、65℃で 10 分間加熱して DNase I を失活させます。サンプルはそのまま次の転写実験に使用できます。

ノート

1. RNA 1 μg あたり 1U DNase I を使用するか、RNA 1 μg 未満の場合は 1U DNase I を使用します。

2. 酵素の不活化中に RNA が分解されるのを防ぐために、EDTA を最終濃度 5 mM で添加する必要があります。