プロテイナーゼK（凍結乾燥粉末）
カタログ番号: HC4500A
プロテイナーゼ K は、幅広い基質特異性を備えた安定なセリンプロテアーゼです。界面活性剤の存在下でも、多くのタンパク質を自然な状態で分解します。結晶および分子構造の研究から得られた証拠は、この酵素が活性部位触媒トライアド (Asp) を持つズブチリシンファミリーに属していることを示しています。39-彼の69- サー224）。切断の主な部位は、ブロックされたαアミノ基を持つ脂肪族および芳香族アミノ酸のカルボキシル基に隣接するペプチド結合です。幅広い意味でよく使われます特異性。
保管条件
短期保存は2～8℃、長期保存は-25～-15℃。ドライパウダー状態 -25~-15℃で3年間有効。酵素粉末を適切な量に溶解する必要があります。
仕様
| 外観 | 白色からオフホワイトの非晶質凍結乾燥粉末 |
| 活動 | ≥30 U/mg |
| DNase | 何も検出されませんでした |
| RNase | 何も検出されませんでした |
プロパティ
| EC番号 | 3.4.21.64 (トリチラキウム アルバムからの組換え) |
| 分子量 | 29 kDa (SDS-PAGE) |
| 等電点 | 7.81 |
| 最適なpH | 7.0～12.0 図1 |
| 最適な温度 | 65℃ 図2 |
| pH安定性 | pH 4.5～12.5 (25℃、16h) 図3 |
| 熱安定性 | 50℃以下(pH8.0、30分) 図4 |
| 活性剤 | SDS、尿素 |
| 阻害剤 | フルオロリン酸ジイソプロピル;フェニルメチルスルホニルフルオリド |
アプリケーション
1. 遺伝子診断キット
2. RNA および DNA 抽出キット
3. 組織からの非タンパク質成分の抽出、DNA ワクチンやヘパリンの調製などのタンパク質不純物の分解
4. パルス電気泳動による染色体 DNA の調製
5. ウェスタンブロット
6. 酵素的グリコシル化アルブミン試薬の in vitro 診断
予防
使用時や計量時は保護手袋や保護メガネを着用し、使用後は換気をよくしてください。この製品は、皮膚アレルギー反応や重篤な眼刺激を引き起こす可能性があります。吸入すると、アレルギーや喘息の症状、呼吸困難を引き起こす可能性があります。呼吸器への刺激を引き起こす可能性があります。
アッセイ
単位の定義
1 ユニット (U) は、以下の条件下でカゼインを加水分解して 1 分間に 1 μmol のチロシンを生成するのに必要な酵素の量として定義されます。
試薬の準備
試薬I：ミルクカゼイン1gを0.1Mリン酸ナトリウム溶液（pH8.0）50mlに溶解し、65〜70℃の水中で15分間インキュベートし、撹拌して溶解し、水で冷却し、水酸化ナトリウムでpH8.0に調整し、定容した。 100ml。
試薬 II: 0.1M トリクロロ酢酸、0.2M 酢酸ナトリウム、0.3M 酢酸。
試薬III: 0.4M Na2CO3解決。
試薬IV：フォリント試薬を純水で5倍に希釈したもの。
試薬Ｖ：酵素希釈剤：０．１Ｍリン酸ナトリウム溶液（ｐＨ８．０）。
試薬ＶＩ：チロシン溶液：０．２Ｍ ＨＣＬに溶解した０、０．００５、０．０２５、０．０５、０．０７５、０．１、０．２５μｍｏｌ／ｍｌのチロシン。
手順
1. 試薬 I 0.5ml を 37℃に温め、酵素溶液 0.5ml を加えてよく混合し、37℃で 10 分間インキュベートします。
2. 1 ml の試薬 II を加えて反応を停止し、よく混合し、30 分間インキュベートを続けます。
3. 反応溶液を遠心分離します。
4. 上清 0.5ml をとり、試薬 III 2.5ml、試薬 IV 0.5ml を加えよく混合し、37℃で 30 分間インキュベートします。
5.外径660ODと判定されました1;ブランク対照グループ: OD を測定するための酵素溶液の代わりに 0.5 ml 試薬 V を使用します。660ODとして2、ΔOD=OD1-OD2.
6. L-チロシン標準曲線: 5 mL 遠沈管に異なる濃度の L チロシン溶液 0.5 mL、試薬 III 2.5 mL、試薬 IV 0.5 mL を入れ、37℃で 30 分間インキュベートし、OD を検出します。660異なる濃度の L-チロシンについて標準曲線 Y=kX+b を取得します。ここで、Y は L-チロシン濃度、X は OD です。600.
計算
2: 反応液の総量(mL)
0.5：酵素液の体積（mL）
0.5：発色測定に使用した反応液量（mL）
10: 反応時間(分)
Df: 希釈倍数
C：酵素濃度（mg/mL）
参考文献
1. ウィーガー U およびヒルツ H. FEBS レター。(1972);23:77。
2. Wieger U および Hilz H. Biochem.生物物理学。解像度共通。(1971);44:513。
3. ヒルツ、H.ら、ユーロ。Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．(1975);56:103–108。
4. サンブルック・Jet みんな、 Molecular Cloning: A Laboratory Manual、第 2 版、Cold Spring HarborLaboratory Press、Cold Spring Harbor (1989)。
図2 最適温度
20 mM リン酸 K 緩衝液 pH 8.0 中での反応。酵素濃度：1mg/mL
図3 pH 安定性
25℃、50mM 緩衝液で 16 時間処理: pH 4.5-5.5、酢酸塩。pH 6.0-8.0、リン酸ナトリウム;pH 8.0-9.0、トリス-HCL。pH 9.0～12.5、グリシン-NaOH。酵素濃度：1mg/mL
図4 熱 安定性
50mM Tris-HCL緩衝液、pH 8.0で30分間処理。酵素濃度：1mg/mL
図5 保管 安定ty at 25℃
