ワンステップ高速 RT-qPCR プローブ Premix-UNG
カタログ番号: HCR5143A
ワンステップ RT-qPCR プローブキット (FOR FAST) は、RNA (RNA ウイルスなど) を鋳型として使用するシングルプレックスまたはマルチプレックス定量 PCR に適したプローブベースの RT-qPCR 高速検出キットです。この製品は、新世代の抗体修飾 Taq DNA ポリメラーゼとワンステップ専用の逆転写酵素を使用しており、迅速な増幅のために最適化されたバッファーを使用しており、より速い増幅速度、より高い増幅効率と特異性を備えています。低濃度サンプルと高濃度サンプルのシングルプレックスとマルチプレックスの両方で、短時間でのバランスのとれた増幅をサポートします。
コンポーネント
1. 5×RT-qPCR バッファー (U+)
2.酵素ミックス(U+)
ノート:
a.5×RT-qPCR バッファー (U+) には dNTP および Mg が含まれます2+;
b.酵素ミックス (U+) には、逆転写酵素、Hot Start Taq DNA ポリメラーゼ、RNase 阻害剤、UDG が含まれます。
c.RNase-Free チップ、EP チューブなどを使用してください。
使用前に、5×RT-qPCR バッファー (U+) をよく混合してください。解凍後に沈殿物が生じた場合は、緩衝液が室温に戻るのを待って混合溶解し、通常どおり使用してください。
保管条件
ドライアイスを同封して出荷し、-25〜-15℃で1年間保存可能です。
説明書
1. 反応 システム
コンポーネント | 容量(20μL) 反応) |
2×RT-qPCRバッファー | 4μL |
酵素ミックス(U+) | 0.8μL |
プライマーフォワード | 0.1~1.0μM |
プライマーリバース | 0.1~1.0μM |
TaqMan プローブ | 0.05~0.25μM |
テンプレート | XμL |
RNaseフリー水 | 25μLまで |
注:反応量は10~50μLです。
2. サイクリングプロトコル (S標準)
サイクル ステップ | 温度 | 時間 | サイクル |
逆転写 | 55℃ | 10分 | 1 |
初期変性 | 95℃ | 30秒 | 1 |
変性 | 95℃ | 10秒 | 45 |
アニーリング/エクステンション | 60℃ | 30秒 |
サイクリングプロトコル (速い) サイクル ステップ |
温度 |
時間 |
サイクル |
逆転写 | 55℃ | 5分 | 1 |
初期変性 | 95℃ | 5秒 | 1 |
変性 | 95℃ | 3秒 | 43 |
アニーリング/エクステンション | 60℃ | 10秒 |
ノート:
a.逆転写温度は 50℃ ~ 60℃ で、温度を上げると複雑な構造や CG 含有量の高いテンプレートの増幅に役立ちます。
b.最適なアニーリング温度はプライマーの Tm 値に基づいて調整する必要があり、リアルタイム PCR 装置に基づいて蛍光シグナル収集の最短時間を選択する必要があります。
ノート
健康と安全を確保するために、白衣や手袋などの必要な個人用保護具を着用してください。