RT-LAMP カラーメトリック マスター ミックス HCB5204A
この製品には、反応バッファー、RT-酵素ミックス (Bst DNA ポリメラーゼおよび耐熱性逆転写酵素)、凍結乾燥保護剤および発色色素成分が含まれています。使用するには、反応酵素とプライマーを混合してテンプレートに追加する Buffer を使用するだけです。凍結乾燥保護剤の添加はそのままでよい。凍結乾燥機に接続して凍結乾燥し、使用時にはプライマーと鋳型のみを添加した。このキットは、増幅を迅速かつ明確に視覚的に検出できます。陰性反応は赤色で示され、陽性反応は黄色への変化で示されます。
成分
| 成分 | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| ループ媒介増幅バッファー (色素入り) | 0.96mL | 4.80mL×2 | 9.60mL×10本 |
| RT酵素ミックス | 270μL | 2.70mL | 2.70mL×10本 |
| 凍結乾燥保護剤 | 0.96mL×2 | 9.60mL×2 | 9.60mL×20本 |
アプリケーション
DNA または RNA の等温増幅用。
保管条件
ドライアイスで輸送し、-25～-15℃で保管。頻繁な凍結融解は避けてください。製品の有効期限は 12 か月です。
プロトコル
1.使用する反応バッファーは室温で解凍してください。軽くボルテックスするか、チューブを数回反転させて完全に混合し、遠心分離して液体をチューブの底に集めます。
2.反応系の準備。この試薬は、液体反応混合物と凍結乾燥系混合物の 2 つの反応系で調製できます。
1) 液体反応混合物の調製
| 成分 | 音量 |
| ループ媒介増幅バッファー (色素入り) | 10μL |
| RT酵素ミックス | 2.8μL |
| 10 × プライマーミックスa | 5μL |
| テンプレート DNA/RNA b | ×μL |
| ヌクレアーゼフリー水 | 50μLまで |
2) 凍結乾燥システムミックス
① 凍結乾燥ミックスの準備
| 成分 | 音量 |
| ループ媒介増幅バッファー (色素入り) | 10μL |
| 凍結乾燥保護剤 | 20μL |
| RT酵素ミックス | 2.8μL |
| ヌクレアーゼフリー水 | 50μLまで |
② 凍結乾燥: 調製した Mix を 50μL 系で凍結乾燥しました。
③ 反応混合物の調製
| 成分 | 音量 |
| 凍結乾燥混合物 | 1個 |
| 10 × プライマーミックスa | 5μL |
| テンプレート DNA/RNA b | ×μL |
| ヌクレアーゼフリー水 | 50μLまで |
ノート：
1) a.10×プライマーミックス: 16 μM FIP/BIP、2 μM F3/B3、4 μM ループ F/B;
2) b.核酸鋳型にはDEPC（水溶性）を推奨します。
1.65℃で30～45分間インキュベートします。色の変化に応じて適切に延長できます。反応時間。
2.肉眼では黄色が陽性、赤色が陰性でした。
ノート
1.バッファーチューブの底に塩が現れる場合がありますので、室温で軽くボルテックスするかチューブを数回反転させて完全に混合してください。
2.反応温度はプライマーの状態に応じて62℃～68℃の間で最適化できます。
3.包装された試薬は長時間空気にさらさないでください。
4.赤と黄色の変色反応は反応系のpH変化に依存します。Tris核酸を含む保存液は使用しないでください。ddHの使用を推奨します。2O 保存された核酸。
5.実験は、反応系の準備、凍結乾燥、サンプル処理およびサンプル添加プロセスを含めて標準化する必要があります。
6.汚染を避けるために、超クリーンベンチで反応システムを準備するか、偽陽性干渉を避けるために部屋のドラフトにテンプレートを追加することをお勧めします。
