温度に敏感な UNG
温度感受性 UNG (TS-UNG) は、大腸菌での組換え発現によって得られます。この酵素は、ウラシルを含む一本鎖および二本鎖 DNA からの遊離ウラシルの放出を触媒し、RNA に対しては不活性です。TS-UNG酵素は、従来の大腸菌遺伝子由来のUNG酵素と比較して、低温（20℃～37℃）での活性が高く、温度に敏感で失活しやすい（50℃）ため、dUTPを含む増幅酵素の分解を回避します。従来の UNG 酵素の不活化後に残る可能性のある残留活性により、室温で生成物を分解します。したがって、TS-UNG 酵素は PCR コンタミネーション防止反応に適しているだけでなく、RT-PCR 増幅プログラムとの相性も良く、RT-PCR コンタミネーション防止反応にも使用できます。
推奨アプリケーション
汚染防止増幅
保存条件
長期保管の場合は -20°C で、使用前によく混合する必要があり、頻繁な凍結融解は避けてください。
ストレージバッファ
20 mM トリス-HCl (pH 7.5)、100 mM NaCl、0.1 mM EDTA、1 mM DTT、安定剤、50% グリセロール。
単位の定義
dU塩基を含む1μgの一本鎖DNAを37℃で1時間で分解するのに必要な酵素の量は、1単位の活性（U）です。
品質管理
1.98%を超えるSDS-PAGE電気泳動純度
2.分解活性、バッチ間の制御、安定性
3.外因性ヌクレアーゼ活性、外因性エンドヌクレアーゼまたはエキソヌクレアーゼの汚染はありません。
説明書
| コンポーネント | 体積(μL) | 最終濃度 |
| 10 × PCR バッファー (dNTP フリー、Mg²+無料） | 5 | 1× |
| dUTP（dCTP、dGTP、dATP） | - | 200μM |
| dUTP (dTTP を置き換え) | - | 200-600μM |
| 25 mM MgCl2 | 2～8μL | 1～4mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25U |
| 1U/μLTS-UNG | 0.5（0.1～0.5） | 0.5U(0.1～0.5U) |
| 25 × プライマーミックスある | 2 | 1× |
| テンプレート | - | ＜1μg/反応 |
| ddH₂O | 50まで | - |
注: a: qPCR/qRT-PCR に使用する場合、蛍光プローブを反応系に追加する必要があります。通常、最終プライマー濃度 0.2 μM で良好な結果が得られます。反応性能が悪い場合は、プライマー濃度を0.2～1μMの範囲で調整できます。通常、プローブ濃度は 0.1 ～ 0.3 μM の範囲で最適化されます。濃度勾配実験を実行して、プライマーとプローブの最適な組み合わせを見つけることができます。
ノート
1.TS-UNG酵素の最適反応温度は比較的低く、20℃〜37℃の範囲で最適化でき、酵素の投与量と反応時間は0.1〜0.5U、5〜10Uの範囲で最適化できます。 10分;そして酵素は逆転写の過程で不活化される可能性があります。
2.コンタミネーションを防ぐため、PCRやRT-PCRに適しています。
3.頻繁な凍結融解を避け、大きな温度変動にさらさないでください。
4.増幅する遺伝子によってdUTPの利用効率やUNG酵素の感度が異なるため、UNGシステムの使用により検出感度が低下する場合は、反応システムを調整して最適化する必要があります。技術サポートが必要な場合は、お問い合わせください。当社。
