ウォーム スタート Bst 2.0 DNA ポリメラーゼ (グリセロール フリー)
Bst DNA ポリメラーゼ V2 は Bacillus stearothermophilus DNA ポリメラーゼ I に由来し、5'→3' DNA ポリメラーゼ活性と強力な鎖置換活性を持ちますが、5'→3' エキソヌクレアーゼ活性は持ちません。Bst DNA ポリメラーゼ V2 は、鎖置換、等温増幅 LAMP (ループ媒介等温増幅)、および高速シーケンスに理想的に適しています。Bst DNA ポリメラーゼ V2 は、可逆的修飾技術によって得られた Bst DNA ポリメラーゼ V2 (HC5005A) をベースにしたホットスタート バージョンで、室温で DNA ポリメラーゼ活性を阻害できるため、室温で反応系を操作および製剤化することができ、不純物を防ぐことができます。特異的な増幅と反応効率の向上を実現し、このバージョンは凍結乾燥可能です。さらに、その活性は高温で放出されるため、別の活性化ステップは必要ありません。
コンポーネント
| 成分 | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA ポリメラーゼ V2 (グリセロールフリー)(8U/μL) | 0.2mL | 1mL | 10mL |
| 10×HC Bst V2バッファ | 1.5mL | 2×1.5mL | 3×10mL |
| MgSO4(100mM) | 1.5mL | 2×1.5mL | 2×10mL |
アプリケーション
1.LAMP等温増幅
2.DNA鎖単一置換反応
3.高GC遺伝子配列決定
4.ナノグラムレベルのDNA配列決定。
保存条件
輸送は0℃以下、保管は-25℃～-15℃で行ってください。
単位の定義
1単位は、65℃で30分間に25 nmolのdNTPを酸不溶性物質に取り込む酵素の量として定義されます。
品質管理
1.タンパク質純度アッセイ (SDS-PAGE):Bst DNA ポリメラーゼ V2 の純度は、クーマシー ブルー検出を使用した SDS-PAGE 分析により 99% 以上と測定されます。
2.Eエンドヌクレアーゼ活動:最低 8 U の Bst DNA ポリメラーゼ V2 を含む 50 μL の反応液を 1 μg の λDNA と 37 ℃ で 16 時間インキュベートしても、検出可能な分解は生じません。
3.エキソヌクレアーゼ活性:最低 8 U の Bst DNA ポリメラーゼ V2 を含む 50 μL 反応液を 1 μg の λ -Hind Ⅲ 消化 DNA と 37 ℃ で 16 時間インキュベートしても、検出可能な分解は生じません。
4.ニッカーゼ活性:最低 8 U の Bst DNA ポリメラーゼ V2 を含む 50 μL 反応液を 1 μg pBR322 DNA と 37℃で 16 時間インキュベートしても、検出可能な分解は生じません。
5.RNase活性:最低 8 U の Bst DNA ポリメラーゼ V2 を含む 50 μL 反応液を 1.6 μg MS2 RNA と 37℃ で 16 時間インキュベートしても、検出可能な分解は生じません。
6.大腸菌DNA:大腸菌 16S rRNA 遺伝子座に特異的なプライマーを使用した TaqMan qPCR を使用して、120 U の Bst DNA ポリメラーゼ V2 を大腸菌ゲノム DNA の存在についてスクリーニングします。大腸菌ゲノム DNA の混入は 1 コピー以下です。
LAMP反応
| コンポーネント | 25μL |
| 10×HC Bst V2バッファ | 2.5μL |
| MgSO4 (100mM) | 1.5μL |
| dNTP (各 10mM) | 3.5μL |
| SYTO™ 16 グリーン (25×)a | 1.0μL |
| プライマーミックスb | 6μL |
| Bst DNA ポリメラーゼ V2 (グリセロールフリー) (8 U/uL) | 1μL |
| テンプレート | ×μL |
| ddH₂O | 25μLまで |
ノート：
1) a.SYTOTM 16 グリーン (25x): 実験のニーズに応じて、他の色素を代替品として使用できます。
2) b.プライマーミックス：20μM FIP、20μM BIP、2.5μM F3、2.5μM B3、5μM LF、5μM LBなどを混合して得られます。
反応と状態
1 × HC Bst V2 バッファー、インキュベーション温度は 60°C ～ 65°C です。
熱不活化
80℃、20分
