CHO HCP ELISA キット
このアッセイでは、ワンステップ免疫吸着 ELISA 法が使用されます。CHOK1 HCPを含むサンプルは、HRP標識ヤギ抗CHOK1抗体およびELISAプレートにコーティングされた抗CHOK1抗体と同時に反応し、最終的に固相抗体-HCP標識抗体のサンドイッチ複合体を形成します。結合していない抗原抗体は、ELISA プレートを洗浄することで除去できます。十分な反応を得るためにTMB基質をウェルに添加します。停止液を加えて発色を止め、反応液の450/650nmにおけるODまたは吸光度をマイクロプレートリーダーで読み取ります。OD 値または吸光度値は、溶液中の HCP 含有量に比例します。これから、標準曲線に従って溶液中の HCP 濃度を計算できます。
応用
このキットは、サンプル中の CHOK1 宿主細胞タンパク質残基の含有量を定量的に検出するために使用されます。
Cコンポーネント
S/N | 成分 | 集中 | 保管条件 |
1 | CHOK1 HCP スタンダード | 0.5mg/mL | ≤–20℃ |
2 | 抗CHO HCP-HRP | 0.5mg/mL | ≤–20℃、遮光してください |
3 | TMB | NA | 2~8℃、遮光 |
4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2~8℃ |
5 | 停止溶液 | NA | RT |
6 | マイクロプレートシーラー | NA | RT |
7 | BSA | NA | 2~8℃ |
8 | 高吸着プレコートプレート | NA | 2~8℃ |
必要な機器
消耗品・装備品 | 製造 | カタログ |
マイクロプレートリーダー | 分子デバイス | Spectra Max M5、M5e、または同等品 |
サーモミキサー | エッペンドルフ | Eppendorf/5355、または同等品 |
ボルテックスミキサー | イカ | MS3 デジタル、または同等品 |
保存性と安定性
1.-25~-15℃で輸送してください。
2.保管条件は表1に示すとおりである。成分 1 ~ 2 は ≤ –20°C で保存され、5 ~ 6 は室温で保存されます、3、4、7、8は2~8℃で保存。有効期間は12ヶ月です。
製品パラメータ
1。感度: 1ng/mL
2.検出範囲:3-100ng/mL
3.精度: アッセイ内 CV ≤ 10%、アッセイ間 CV ≤ 15%
4.HCP カバレッジ: >80%
5.特異性: このキットは精製プロセスとは無関係に CHOK1 HCP と特異的に反応するため、汎用的です。
試薬の準備
1.PBST 0.05%
ddH で希釈した 20×PBST 0.05% を 15 ml 取ります。2O、300mlまで作りました。
2.1.0%BSA
ボトルから 1 g の BSA を取り出し、100 ml の PBST 0.05% で希釈し、完全に溶解するまでよく混合し、2 ~ 8°C で保存します。調製した希釈バッファーの有効期限は 7 日間です。必要に応じて準備することをお勧めします。
3.検出液 2μg/mL
48μL の 0.5 mg/mL 抗 CHO HCP-HRP を取り、11,952μL の 1% BSA で希釈して、最終濃度 2μg/mL の検出溶液を取得します。
4.QC と CHOK1 HCP 標準の作成
チューブ いいえ。 | オリジナル | 集中 | 音量 | 1%BSA | 全容積 | 最後の |
A | 標準 | 0.5mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
表:QCと規格の整備
アッセイ手順
1.上記の「試薬の準備」に示されているように試薬を準備します。
2.50μL の標準、サンプル、および QC (表 3 を参照) を各ウェルに取り、100μL の検出溶液 (2μg/mL) を加えます。プレートをシーラーで覆い、ELISA プレートをサーモミキサー上に置きます。500rpm、25±3℃で2時間インキュベートします。
3.マイクロプレートをシンク内で反転し、コーティング溶液を捨てます。300μLのPBST 0.05%を各ウェルにピペットで注入してELISAプレートを洗浄し、溶液を捨て、洗浄を3回繰り返します。清潔なペーパータオルの上でプレートを裏返し、軽くたたいて乾燥させます。
4.TMB 基質 (表 1 参照) 100μL を各ウェルに加え、ELISA プレートを密閉し、暗所、25±3℃で 15 分間インキュベートします。
5.停止液 100μL をピペットで各ウェルに入れます。
6.マイクロプレートリーダーを使用して450/650nmの波長で吸光度を測定します。
7。SoftMax または同等のソフトウェアでデータを分析します。4 パラメーターのロジスティック回帰モデルを使用して標準曲線をプロットします。
標準曲線の例
注: サンプル中の HCP 濃度が標準曲線の上限を超える場合は、試験前に希釈バッファーで適切に希釈する必要があります。
ノート
停止液は 2M 硫酸です。飛沫がかからないよう取り扱いにご注意ください。