マウスジェノタイピングキット

カタログ番号: HCR2021A

本製品は、マウスの遺伝子型を迅速に同定するために設計された、DNA粗抽出およびPCR増幅システムを含むキットです。この製品は、溶解バッファーとプロテイナーゼ k による単純な切断後、マウスの尾、耳、足の指、およびその他の組織から直接 PCR 増幅に使用できます。一晩の消化、フェノールクロロホルム抽出、カラム精製が不要なため、シンプルで実験にかかる時間を短縮できます。この製品は、最大 2 kb のターゲット フラグメントの増幅および最大 3 対のプライマーを使用したマルチプレックス PCR 反応に適しています。2×マウス組織ダイレクト PCR ミックスには、遺伝子操作された DNA ポリメラーゼ、Mg が含まれています。²⁺、dNTP、および最適化されたバッファーシステムにより、高い増幅効率と阻害剤耐性が得られるため、テンプレートとプライマーを追加し、生成物を1倍に再水和することでPCR反応を実行できます。この製品で増幅された PCR 産物は 3' 末端に顕著な「A」塩基を持ち、精製後 TA クローニングに直接使用できます。

コンポーネント

保管条件

製品は-25〜-15℃で2年間保管してください。解凍後の Lysis Buffer は、短期間の繰り返し使用のために 2 ～ 8℃ で保存でき、使用時によく混合します。

応用

この製品は、マウスノックアウト解析、トランスジェニック検出、ジェノタイピングなどに適しています。

特徴

1.シンプルな操作: ゲノム DNA を抽出する必要はありません。

2.幅広い用途: さまざまなマウス組織の直接増幅に適しています。

説明書

1.ゲノムDNAの放出

1) ライセートの調製

組織ライセートは、溶解するマウスサンプルの数に応じて調製されます（組織ライセートは投与量に応じて現場で調製し、十分に混合して使用する必要があります）。単一サンプルに必要な試薬の割合は次のとおりです。

2) サンプルの調製と溶解

推奨されるティッシュの使用法

適量のマウス組織サンプルを清潔な遠心管に採取し、新鮮な組織ライセート 200μL を各遠心管に加え、ボルテックスして振盪し、55℃で 30 分間インキュベートした後、98℃で 3 分間加熱します。

3) 遠心分離

ライセートをよく振り、12,000 rpm で 5 分間遠心分離します。上清は PCR 増幅のテンプレートとして使用できます。テンプレートの保存が必要な場合は、上清を別の滅菌遠沈管に移し、-20℃で 2 週間保存してください。

2.PCR増幅

2×Mouse Tissue Direct PCR Mix を -20℃ から取り出し、氷上で解凍し、上下を逆にして混合し、以下の表に従って PCR 反応系を調製します（氷上で操作します）。

注記：

a) 添加量は系の 1/10 を超えないようにしてください。添加しすぎると PCR 増幅が阻害される場合があります。

推奨される PCR 条件

注記：

a) アニーリング温度: プライマーの Tm 値を参考に、プライマーの Tm 値の小さい方 +3~5℃にアニーリング温度を設定することを推奨します。

よくある問題と解決策

1.対象となるストリップがありません

1) 過剰な溶解生成物。最適な量のテンプレートを選択します。通常はシステムの 1/10 以下です。

2) サンプルサイズが大きすぎます。ライセートを 10 倍に希釈して増幅するか、サンプル サイズを減らして再溶解します。

3) 組織サンプルが新鮮ではありません。新鮮な組織サンプルを使用することをお勧めします。

4) プライマーの品質が悪い。ゲノム DNA を増幅に使用してプライマーの品質を検証し、プライマー設計を最適化します。

2.非特異的増幅

1) アニーリング温度が低すぎ、サイクル数が高すぎます。アニーリング温度を上げ、サイクル数を減らします。

2) テンプレート濃度が高すぎます。増幅後にテンプレートの量を減らすか、テンプレートを 10 倍に希釈します。

3) プライマー特異性が低い。プライマー設計を最適化します。

ノート

1.サンプル間の相互汚染を避けるために、複数のサンプリングツールを準備する必要があります。繰り返し使用する必要がある場合は、各サンプリング後にツールの表面を 2% 次亜塩素酸ナトリウム溶液または核酸クリーナーで洗浄できます。

2.新鮮なマウス組織を使用することをお勧めします。また、増幅結果への影響を避けるためにサンプリング量が多すぎないように注意してください。

3.Lysis Buffer は頻繁な凍結融解を避け、短期間の繰り返し使用の場合は 2 ～ 8℃ で保存できます。低温で保管すると沈殿が生じる場合がありますので、使用前に完全に溶解してください。

4.PCR Mix は頻繁な凍結融解を避け、短期間の繰り返し使用の場合は 4℃ で保存できます。

5.この製品は科学的な実験研究のみを目的としており、臨床診断や治療には使用しないでください。