M-MLV Neoscript 逆転写酵素

Neoscript Reverse Transcriptase は、モロニーマウス白血病ウイルス由来の M-MLV 遺伝子の変異スクリーニングと大腸菌での発現により得られる逆転写酵素です。この酵素は RNase H 活性を除去し、より高い温度耐性を備え、高温での逆転写に適しています。そのため、RNAの高次構造や非特異的因子によるcDNA合成への悪影響を排除するのに役立ち、より高い安定性と逆転写合成能力を備えています。この酵素はより高い安定性と逆転写合成能力を備えています。

コンポーネント

1.200 U/μL Neoscript 逆転写酵素

2.5 × ファーストストランドバッファー (オプション)

* 5 × First-Strand Buffer には dNTP が含まれていません。反応系を準備する際に dNTP を追加してください。

推奨アプリケーション

1.ワンステップ qRT-PCR。

2.RNAウイルスの検出。

保存条件

長期保管の場合は -20°C で、使用前によく混合する必要があり、頻繁な凍結融解は避けてください。

単位の定義

ポリ(A)・オリゴ(dT)を使用し、1ユニットに37℃で10分間で1nmolのdTTPを取り込みます。₂₅テンプレート/プライマーとして。

品質管理

1.SDS-PAGE 電気泳動純度は 98% 以上。

2.増幅感度、バッチ間の制御、安定性。

3.外因性ヌクレアーゼ活性なし、外因性エンドヌクレアーゼまたはエキソヌクレアーゼの汚染なし

最初の連鎖反応ソリューションの反応セットアップ

1.反応混合物の調製

ノート：a/b: 実験のニーズに応じて、さまざまな種類のプライマーを選択してください。

2.65℃で5分間加熱し、氷上で2分間急冷します。

3.以下のコンポーネントを上記のシステムに合計 20µL になるまで加え、穏やかに混合します。

4.反応は以下の条件で行ってください。

(1) ランダムプライマーを使用する場合は、25℃で 10 分間反応させ、その後 50℃で 30 ～ 60 分間反応させます。

(2) Oligo dT または特異的プライマーを使用する場合は、50℃で 30 ～ 60 分間反応を行ってください。

5.95℃、5分間加熱してNeoscript Reverse Transcriptaseを失活させ、反応を停止させます。

6.逆転写産物は、PCR反応や蛍光定量PCR反応に直接使用することも、-20℃で長期保存することもできます。

PCRR反応：

1.反応混合物の調製

ノート：a: 第一連鎖反応液の添加量が多すぎると、PCR 反応が阻害される場合があります。

2.PCR反応手順

ノート

1.42℃～55℃の範囲で逆転写温度の最適化に適しています。

2.安定性が高く、高温での逆転写増幅に適しています。また、RNA の複雑な構造領域を効率よく通過するのに有利です。また、それはワンステップ多重蛍光定量的 RT-PCR 検出に適しています。

3.各種PCR増幅酵素との相性が良く、高感度RT-PCR反応に適しています。

4.高感度ワンステップ蛍光定量RT-PCR反応に適しており、低濃度のテンプレートの検出率を効果的に向上させます。

5.cDNAライブラリーの構築に適しています。