マルチプレックス ワン ステップ RT-qPCR プレミックス
説明
カタログ番号: HCR5141A
Multiplex One Step RT-qPCR Premix は、RNA を鋳型としたマルチプレックス定量 PCR キットです。実験では逆転写反応と定量的PCRを同じ反応チューブ内で行うため、実験操作が簡略化され、コンタミネーションのリスクが軽減されます。バッファーと酵素の混合物の独自設計は、ワンステップ凍結乾燥システムで使用できます。このキットは、定量的増幅のためにホットスタート Taq DNA ポリメラーゼを使用してファーストストランド cDNA を効率的に合成するために耐熱性逆転写酵素を利用します。最適化された反応バッファーや酵素ミックスなどが含まれており、非特異的PCR増幅を効果的に抑制し、複数のqPCR反応の増幅効率を高める因子が追加されており、プライマーの増幅効率を確保しながら複数の蛍光定量増幅が可能です。
コンポーネント
名前 |
1. リオバッファー |
2. リオ酵素ミックス |
3. リオ保護剤 |
輸送条件イオン
A: リオバッファーおよび保護剤: -25 ~ -15℃、保存期間は 1 年です。
B: リオ酵素ミックス、2 ~ 8 ℃、保存期限は 6 ヶ月です。
操作説明書
1. 反応系(25μLを例にします)
コンポーネント | 体積(μL) | 最終濃度 |
リオバッファー | 6 | 1* |
リオ酵素ミックス | 1 | - |
リオ保護剤 | 8 | - |
プライマーミックス(10μM) | 1 | 0.1~1μM |
プローブミックス (10μM) | 0.5 | 0.05~0.5μM |
RNAテンプレート | 5 | - |
DEPC H2O | 25まで | - |
2. 最適化されたサイクリングプロトコル
1) 標準サイクリングプロトコル
反応段階 | 温度 | 時間 | サイクル | |
1 | 逆転写 | 50℃a | 10分 | 1 |
2 | 初期変性 | 95℃ | 5分 | 1 |
3 | 増幅反応 | 95℃ | 15秒 | 45サイクル |
60℃b | 30秒c |
2) 高速サイクルプロトコル
| 反応段階 | 温度 | 時間 | サイクル |
1 | 逆転写 | 50℃a | 2分 | 1 |
2 | 初期変性 | 95℃ | 2秒 | 1 |
3 | 増幅反応 | 95℃ | 1秒 |
45サイクル |
60℃b | 13秒c |
注記:
a) 逆行する 転写:温度は42°Cまたは50°C、10〜15分間を選択できます。
b) 増幅反応:設計したプライマーのTm値に応じて温度を調整します。
c)蛍光 信号 取得: の要件に従って実験手順を設定してください。楽器の説明書。
技術情報・仕様
ホットスタート | ホットスタート内蔵 |
検出方法 | プライマープローブの検出 |
PCR法 | ワンステップ RT-qPCR |
サンプルの種類 | RNA |
ノート
1. この製品は研究専用です。
2. 健康と安全を確保するために、白衣や手袋などの必要な個人用保護具を着用してください。