ルナーゼA
リボヌクレアーゼ A (RNaseA) は、分子量約 13.7 kDa の 4 つのジスルフィド結合を含む一本鎖ポリペプチドです。RNase A は、一本鎖 RNA の C および U 残基を特異的に分解するエンドリボヌクレアーゼです。具体的には、切断はヌクレオチドの 5'-リボースと隣接するピリミジン ヌクレオチドの 3'-リボースのリン酸基によって形成されるホスホジエステル結合を認識し、2,3'-環状リン酸が対応する 3'-リン酸に加水分解されます。 'ヌクレオシドリン酸（例えば、pG-pG-pC-pA-pGはRNase Aによって切断され、pG-pG-pCpおよびA-PGが生成される）。RNase A は、一本鎖 RNA の切断において最も活性があります。推奨使用濃度は1～100μG/mLで、さまざまな反応系に対応します。低塩濃度 (0 ～ 100 mM NaCl) を使用して、一本鎖 RNA、二本鎖 RNA、および RNA-DNA ハイブリダイゼーションによって形成された RNA 鎖を切断できます。ただし、高塩濃度 (≥0.3 M) では、RNase A は一本鎖 RNA のみを特異的に切断します。
RNase A は、プラスミド DNA またはゲノム DNA の調製中に RNA を除去するために最も一般的に使用されます。調製プロセス中に DNase が活性であるかどうかは、反応に容易に影響を与える可能性があります。ウォーターバスで煮沸するという従来の方法を使用して、DNase 活性を不活性化できます。本品にはDNase、プロテアーゼが含まれていないため、使用前の加熱処理が不要です。さらに、本製品はRNaseプロテクション解析やRNA配列解析などの分子生物学実験にも使用できます。
保管条件
-25～-15℃での保存が可能で、有効期限は2年間です。
説明書
これは、RNase A 保存溶液を調製するための一般的な方法の 1 つです。で準備することもできます他の方法は、実験室の伝統的な方法または参考文献（例えば、10 mM Tris-HCl、pH 7.5 または Tris-NaCl 溶液に直接溶解）
1. 10 mM 酢酸ナトリウム (pH 5.2) を使用して 10 mg/mL の RNase A 保存溶液を調製します。
2. 100℃で15分間加熱
3. 室温まで冷却し、1/10 量の 1 M Tris-HCl (pH 7.4) を加え、pH 7.4 に調整します (pH 7.4)。例、10g/ml RNase 保存溶液 1M Tris-HCL、PH7.4 を 500ml 加えます)
4. -20℃で冷凍保存できるように小包装されており、最長2年間安定です。
[注意事項]: RNaseA 溶液を中性条件で沸騰させると、RNase の沈殿が形成されます。より低い pH で煮沸すると、沈殿が観察されますが、これはタンパク質不純物の存在が原因である可能性があります。煮沸後に沈殿物が見られる場合は、高速遠心分離（13000rpm）により不純物を除去し、小分けして冷凍保存できます。
商品情報
| 同義語 | リボヌクレアーゼ I;膵臓リボヌクレアーゼ;リボヌクレアーゼ 3'-ピリミドノオリゴヌクレオチドヒドロラーゼ;Rnase A;エンドリボヌクレアーゼ I |
| CAS番号 | 9001-99-4 |
| 外観 | 白色凍結乾燥粉末 |
| 分子量 | ~ 13.7kDa (アミノ酸配列) |
| PH値 | 7.6 (アクティビティ範囲 6 ～ 10) |
| 適切な温度 | 60℃（活動範囲15～70℃） |
| 活性化剤 | Na2+。K+ |
| 阻害剤 | RNase阻害剤 |
| 不活化方法 | 加熱しても不活化できないため、遠心カラムの使用をお勧めします。 |
| 起源 | ウシ |
| 溶解性 | 水に可溶（10mg/ml） |
| 乾燥時の損失 | ≤5.0% |
| 酵素活性 | ≥60 クニッツ単位/mg |
| 等電点 | 9.6 |
ノート
安全と健康のため、作業時には白衣と使い捨て手袋を着用してください。
