プロテイナーゼK mNGS（液体）
プロテイナーゼ K は、幅広い基質特異性を備えた安定なセリンプロテアーゼです。界面活性剤の存在下でも、多くのタンパク質を自然な状態で分解します。結晶および分子構造の研究から得られた証拠は、この酵素が活性部位触媒トライアド (Asp) を持つズブチリシンファミリーに属していることを示しています。39-彼の69-サー224）。切断の主な部位は、ブロックされたαアミノ基を持つ脂肪族および芳香族アミノ酸のカルボキシル基に隣接するペプチド結合です。その広範な特異性のために一般的に使用されます。このプロテイナーゼ K は、mNGS 用に特別に設計されています。他のプロテイナーゼ K と比較して、同じ酵素性能を持ちながら核酸の混入がさらに少なく、下流の mNGS アプリケーションをより確実に行うことができます。
保管条件
2～8℃ 2年間
仕様
| 外観 | 無色～淡褐色の液体 |
| 活動 | ≧800U/ml |
| タンパク質濃度 | ≥20 mg/ml |
| ニッケス | 何も検出されませんでした |
| DNase | 何も検出されませんでした |
| RNase | 何も検出されませんでした |
プロパティ
| EC番号 | 3.4.21.64(トリチラキウムアルバムからの組換え) |
| 等電点 | 7.81 |
| 最適なpH | 7.0～12.0 図1 |
| 最適な温度 | 65℃ 図2 |
| pH安定性 | pH4.5～12.5（25℃、16時間） 図3 |
| 熱安定性 | 50℃以下（pH8.0、30分） 図4 |
| 保存安定性 | 25℃で12ヶ月間90%以上の活性 |
| 活性剤 | SDS、尿素 |
| 阻害剤 | フルオロリン酸ジイソプロピル;フェニルメチルスルホニルフルオリド |
アプリケーション
1. 遺伝子診断キット
2. RNA および DNA 抽出キット
3. 組織からの非タンパク質成分の抽出、DNA などのタンパク質不純物の分解ワクチンとヘパリンの調製
4. パルス電気泳動による染色体 DNA の調製
5. ウェスタンブロット
6. 酵素的グリコシル化アルブミン試薬の in vitro 診断
予防
使用時や計量時は保護手袋や保護メガネを着用し、使用後は換気をよくしてください。この製品は、皮膚アレルギー反応や重篤な眼刺激を引き起こす可能性があります。吸入すると、アレルギーや喘息の症状、呼吸困難を引き起こす可能性があります。呼吸器への刺激を引き起こす可能性があります。
単位の定義
1 ユニット (U) は、カゼインを加水分解して 1 μmol を生成するのに必要な酵素の量として定義されます。以下の条件での 1 分あたりのチロシン量。
試薬の準備
試薬I：ミルクカゼイン1gを0.1Mリン酸ナトリウム溶液（pH8.0）50mlに溶解し、65〜70℃の水中で15分間インキュベートし、撹拌して溶解し、水で冷却し、水酸化ナトリウムでpH8.0に調整し、定容した。 100ml。
試薬 II: 0.1M トリクロロ酢酸、0.2M 酢酸ナトリウム、0.3M 酢酸。
試薬III: 0.4M Na2CO3解決。
試薬IV：フォリント試薬を純水で5倍に希釈したもの。
試薬Ｖ：酵素希釈剤：０．１Ｍリン酸ナトリウム溶液（ｐＨ８．０）。
試薬 VI: チロシン溶液: 0、0.005、0.025、0.05、0.075、0.1、0.25 umol/ml チロシンを 0.2 μmol/ml に溶解M HCl。
手順
1. 試薬 I 0.5ml を 37℃に温め、酵素溶液 0.5ml を加え、よく混合し、室温でインキュベートします。37℃で10分。
2. 1ml の試薬 II を加えて反応を停止し、よく混合し、30 分間インキュベートを続けます。
3. 反応溶液を遠心分離します。
4. 上清 0.5ml をとり、試薬 III 2.5ml、試薬 IV 0.5ml を加えよく混合し、37℃でインキュベートします。30分間。
5.外径660ODと判定されました1;ブランク対照グループ: 0.5ml 試薬 V を使用して酵素を置き換えますOD を決定するためのソリューション660ODとして2、ΔOD=OD1-OD2.
6. L-チロシン標準曲線: 異なる濃度の L-チロシン溶液 0.5mL、試薬 III 2.5mL、試薬 IV 0.5mL を 5mL 遠心管に入れ、37℃で 30 分間インキュベートし、OD を検出します。660異なる濃度の L-チロシンについて標準曲線 Y=kX+b を取得します。ここで、Y は L-チロシン濃度、X は OD です。600.
計算
2: 反応液の総量(mL)
0.5：酵素液の体積（mL）
0.5：発色測定に使用した反応液量（mL）
10: 反応時間(分)
Df: 希釈倍数
C：酵素濃度（mg/mL）
参考文献
1. ウィーガー U およびヒルツ H. FEBS レター。(1972);23:77。
2. Wieger U および Hilz H. Biochem.生物物理学。解像度共通。(1971);44:513。
3. ヒルツ、H.ら、ユーロ。Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．(1975);56:103–108。
4. サンブルック・Jet みんな、 分子クローニング: 実験マニュアル、第 2 版、コールド スプリング ハーバー研究所出版局、コールド スプリング ハーバー (1989)。
数字
イチジク.1 最適 pH
100mM緩衝液:pH6.0-8.0、リン酸Na;pH8.0～9.0、トリス-HCl;pH9.0～12.5、グリシン-NaOH、酵素濃度：1mg/mL
図2 最適温度
20 mM リン酸 K 緩衝液 pH 8.0 中での反応。酵素濃度：1mg/mL
図3 pH 安定性
25 ℃、50 mM 緩衝液で 16 時間処理: pH 4.5 ～ 5.5、酢酸塩。pH 6.0-8.0、リン酸ナトリウム;pH 8.0-9.0、トリス-塩酸。pH 9.0～12.5、グリシン-NaOH。酵素濃度：1mg/mL
図4 熱 安定性
50 mM Tris-HCl 緩衝液、pH 8.0 で 30 分間処理。酵素濃度：1mg/mL
図5 保管 安定ty at 25℃
