マルチプレックス ワン ステップ RT-qPCR Premix-UNG
カタログ番号: HCB5145A
マルチプレックス ワン ステップ RT-qPCR プローブ キット (UDG Plus) は、RNA を鋳型とするマルチプレックス定量 PCR キットです。実験の過程では、逆転写と定量的 PCR が同じチューブ内で実行されたため、実験操作が簡素化され、コンタミネーションのリスクが軽減されました。このキットでは、耐熱性逆転写酵素によりファーストストランド cDNA を効率的に合成し、HotStart Tag DNA Polymerase により定量的に増幅しました。キットには主に最適化されたMPバッファー、酵素ミックスなどが含まれています。バッファー溶液にはすでにMgが含まれています2+そしてdNTP。さらに、非特異的PCR増幅を効果的に抑制し、複数のqPCR反応の増幅効率を向上させる因子を追加することで、増幅効率を確保し、最大複数の増幅反応を行うことができます。エアロゾル汚染のリスクを効果的に防止するために、dUTP/UDG システムが追加されました。
コンポーネント
1.バッファー
2.酵素ミックス
仕様
| ホットスタート | ホットスタート内蔵 |
| 検出方法 | プライマープローブの検出 |
| PCR法 | ワンステップ RT-qPCR |
| ポリメラーゼ | Taq DNA ポリメラーゼ |
| サンプルの種類 | DNA |
保管条件
ドライアイスを同封して出荷し、-25〜-15℃で1年間保存可能です。頻繁に避ける必要があります凍結融解。個別に保存することをお勧めします。
説明書
1.反応 システム
| コンポーネント | 体積(μL) | 最終濃度 |
| 2 × MP バッファ | 12.5 | 1× |
| 酵素ミックス | 1 | - |
| プライマー/プローブミックス (2.5 μM) | 3 | 0.3μM |
| テンプレートRNA | 1-10 | - |
| RNase フリー H2O | 25まで | - |
ノート：
使用前に必ずよく混合し、激しい振動による過剰な泡を避けてください。
ａ．プライマー濃度：マルチプレックスプライマーを含むプライマーミックス。状況に応じて、最適なプライマー濃度はおそらく0.1～1.0μMの間です。
b.プローブ濃度: 異なる蛍光基を標識する多重プローブを含むプローブ混合物。状況に応じて、最適なプローブ濃度はおそらく 0.05 ～ 0.5 μM の間です。
c.テンプレートの希釈: qPCR は感度が高いため、テンプレートを希釈することをお勧めします。コントロールの Ct 値は 20 ～ 35 が適切です。
d.システムの準備: ヌクレアーゼ残留物のない超清潔な作業テーブル、ピペッター、反応チューブで準備してください。フィルターエレメントを備えたガンヘッドを使用することをお勧めします。相互汚染やエアロゾル汚染を避けてください。
2. 最適化されたサイクリングプロトコル
| サイクル ステップ | 温度 | 時間 | サイクル |
| 逆転写 | 50℃ある | 20分 | 1 |
| 初期変性 | 95℃ | 5分 | 1 |
| 増幅反応 | 95℃ | 15秒 |
40-45 |
| 60℃ b | 30秒 c |
ノート：
ａ．逆転写：温度は42℃または50℃を選択可能です。
b.増幅反応：設計したプライマーのTm値に応じて温度を調整します。
c.蛍光シグナル取得：装置マニュアルの要件に従って実験手順を設定してください。
ノート
健康と安全を確保するために、白衣や手袋などの必要な個人用保護具（PPE）を着用してください。
