RTL逆転写酵素

単位の定義

1 ユニットは、テンプレートプライマーとしてポリ(A)・オリゴ(dT)25 を使用し、50℃で 20 分間で 1 nmol の dTTP を酸沈殿性材料に組み込みます。

コンポーネント

保存条件

輸送は0℃以下、保管は-25℃～-15℃で行ってください。

品質管理

1. の残留活性Eエンドヌクレアーゼ:1μgのλDNAと15ユニットのRTL2.0を含む50μLの反応液を37℃で16時間インキュベートすると、ゲル電気泳動によりネガティブコントロールと同じパターンが示されます。
2. の残留活性エキソヌクレアーゼ:1 μg の Hind Ⅲ 消化 λDNA と 15 単位の RTL2.0 を含む 50 μL 反応液を 37 ℃ で 16 時間インキュベートすると、ゲル電気泳動によりネガティブコントロールと同じパターンが示されます。
3. の残留活性ニッケス:1μgのスーパーコイルpBR322および15単位のRTL2.0を含む50μL反応液を37℃で4時間インキュベートすると、ゲル電気泳動によりネガティブコントロールと同じパターンが示されます。
4. の残留活性RNase:0.48 μgのMS2 RNAおよび15単位のRTL2.0を含む10 μLの反応液を37℃で4時間インキュベートすると、ゲル電気泳動によりネガティブコントロールと同じパターンが示されます。
5. 大腸菌 gDNA:で測定大腸菌特定の HCD 検出キット、15 ユニットの RTL2.0 に含まれるのは 1 未満大腸菌ゲノム。

反応のセットアップ

cDNA合成プロトコル

ノート：

1) Total RNA の推奨投与量は 1ng ～ 1μg です。

2) mRNAの推奨投与量は50ng~100ngでした

サーモ-サイクリング ルーチンの条件 反応：

ノート：

1) ランダムプライマーミックスを使用する場合、25℃でのインキュベーションステップ。

2) ターゲットプライマーミックスを使用する場合は、55℃で 10 ～ 30 分間のインキュベーションステップ。

RT-LAMPプロトコル

ノート：

1) ボルテックスで混合し、短時間遠心分離して回収します。65℃で1時間の恒温インキュベーション。

2) 2 つのバッファは相互運用可能であり、同じ構成を持っています。

ノート

1.本品は-20℃で保存すると白色固体になります。-20℃から取り出し、氷上に約10分間置きます。溶かした後、振って混ぜてご使用いただけます。

2.cDNA産物は-20℃または-80℃で保存することも、PCR反応にすぐに使用することもできます。

3.RNase の汚染を防ぐため、実験エリアを清潔に保ち、作業中は清潔な手袋とマスクを着用してください。