2×Sensi Direct Premix-UNG (プローブ qPCR)

カタログ番号: HCB5151A

SensiDirect Premix-UNG (プローブ qPCR) は、DNA 抽出やサンプル前処理を行わずにサンプルから直接 PCR を実行するように設計されています。この試薬は、ホットスタート DNA ポリメラーゼ、ウラシル DNA グリコシラーゼ (UNG)、RNase 阻害剤、MgCl で構成されています。₂、定量的 PCR (qPCR) 用の dNTP (dTTP の代わりに dUTP を使用)、および安定化剤。この試薬は高い阻害剤耐性を備えているため、DNA 抽出を行わずに、喉のぬぐい液、唾液、抗凝固処理された全血、血漿、血清などのサンプルの検出に直接適用できます。この試薬は、抗阻害性 DNA ポリメラーゼと UNG 酵素の混合酵素を含む qPCR 用の独自のバッファーを使用します。したがって、阻害剤を含むサンプル中の標的遺伝子の良好な増幅が得られ、PCR 残留物やエアロゾル汚染によって引き起こされる偽陽性増幅を抑制できます。この試薬は、Applied Biosystems、Eppendorf、Bio-Rad、Roche などのほとんどの蛍光定量 PCR 装置と互換性があります。

コンポーネント

1. 50×SensiDirect酵素/UNGミックス

2. 2×SensiDirect プレミックス バッファー (dUTP)

保管条件

すべてのコンポーネントは、長期保管の場合は -20℃、最長 3 か月の場合は 4℃ で保管してください。解凍後よく混ぜ、遠心分離してからご使用ください。頻繁な凍結融解は避けてください。

サイクリングプロトコル

ピペッティングの指示

1. プライマーの最終濃度は通常 0.2μM です。より良い結果を得るには、プライマー濃度を 0.2 ～ 1 μM の範囲内で最適化できます。

2. 一般に、プローブ濃度は 0.1 ～ 0.3 μM の範囲で最適化できます。プローブの最適濃度は、リアルタイムPCR増幅装置、プローブの種類、蛍光標識物質の種類に関係する。機器のマニュアルまたは各蛍光プローブの特定の要件を参照してください。

3. 異なる種類のサンプルには、異なる種類、阻害剤の含有量、および標的遺伝子のコピー数が含まれます。サンプル量は実際の状況に応じて考慮してください。必要に応じて、ヌクレアーゼフリーの水または TE バッファーを加えてサンプルの希釈液を作成します。

4. さまざまなサンプルの推奨量:

品質管理

1. 機能検出: qPCR の感度、特異性、再現性。

2. 外因性ヌクレアーゼ活性なし: 外因性エンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼ汚染はありません。

製品に関する注意事項

1. 本製品は、1～5分で活性化できる新しいタイプのホットスタートDNAポリメラーゼを採用しています。反応バッファーが最適化されているため、プローブ法を用いた二重または多重蛍光定量PCRにさらに適しています。

2. PCR 増幅の Rn 値が低すぎる場合、または増幅が明らかに阻害されている場合は、サンプル量を減らすか、反応量を増やすか、サンプルを事前に希釈すると結果が改善される可能性があります。

3. 血液、唾液、尿、咽喉ぬぐい液などの採取は臨床基準の要件に従う必要があり、核酸の分解を防ぐために新鮮なサンプルを使用できます。

4. アンプリコンごとに dUTP に対する利用効率や UNG に対する感度が異なるため、UNG システムを使用する際に検出感度が低下する場合は試薬を最適化する必要があります。技術サポートが必要な場合は、お問い合わせください。

5. ワンステップ反応間のキャリーオーバー PCR 産物の増幅を避けるために、増幅には専用の実験エリアとピペットが必要です。手袋を着用して操作し、頻繁に交換し、PCR 増幅後に反応チューブを開けないでください。