ユニバーサル SYBR GREEN qPCR プレミックス (ブルー)

カタログ番号: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) は、高い感度と特異性を特徴とする 2 × リアルタイム定量 PCR 増幅用のプレソリューションで、色は青色で、サンプル添加トレースの効果があります。コアコンポーネントである Taq DNA ポリメラーゼは、抗体ホットスタートを使用して、サンプル調製中のプライマーアニーリングによる非特異的増幅を効果的に抑制します。同時に、この式は促進因子を追加してPCR反応の増幅効率を向上させ、異なるGC含量（30〜70％）の遺伝子の増幅を均一化するため、定量的PCRは幅広い定量範囲で良好な線形関係を得ることができます。地域。この製品には、ほとんどの qPCR 機器に適用できる特殊な ROX Passive Reference Dye が含まれています。さまざまな機器で ROX の濃度を調整する必要はありません。プライマーとテンプレートを追加するだけで増幅用の反応系を準備できます。

コンポーネント

ユニバーサル ブルー qPCR マスター ミックス

保管条件

保冷剤を同梱して発送しますので、-25℃〜-15℃で18ヶ月保存可能です。反応系の保存時や調製時には強い光の照射を避ける必要があります。

仕様

説明書

1.反応系

[注意]: 激しく振って過剰な泡が発生しないように、使用前によく混ぜてください。

a) プライマー濃度: 最終的なプライマー濃度は 0.2μmol/L ですが、必要に応じて 0.1 ～ 1.0μmol/L の間で調整することもできます。

b) テンプレート濃度: テンプレートが未希釈の cDNA ストック溶液である場合、使用する容量は qPCR 反応の総容量の 1/10 を超えてはなりません。

c) テンプレートの希釈: cDNA ストック溶液を 5 ～ 10 倍に希釈することをお勧めします。添加するテンプレートの最適量は、増幅によって得られる Ct 値が 20 ～ 30 サイクルの場合に優れています。

d) 反応系: 標的遺伝子増幅の有効性と再現性を確保するために、20 μL または 50 μL を使用することをお勧めします。

e) システムの準備: スーパークリーンベンチで準備し、ヌクレアーゼ残留物のないチップと反応チューブを使用してください。フィルターカートリッジを備えたチップを使用することをお勧めします。相互汚染やエアロゾル汚染を避けてください。

2。リアクションプログラム

標準プログラム

クイックプログラム

[注]: 高速プログラムは大部分の遺伝子に適しており、標準プログラムは個々の複雑な二次構造遺伝子に対して試すことができます。

a) アニーリング温度と時間: プライマーの長さとターゲット遺伝子に応じて調整してください。

b) 蛍光シグナル取得 (★): 装置の使用説明書の要件に従って実験手順を設定してください。

c) 融解曲線: 装置のデフォルトのプログラムを通常どおり使用できます。

3. 結果の分析 

定量的実験には、少なくとも 3 つの生物学的複製が必要でした。反応後は増幅曲線と融解曲線を確認する必要があります。

3.1 増幅曲線:

標準増幅曲線は S 字型です。Ct 値が 20 ～ 30 の場合に定量分析が最も正確になります。Ct 値が 10 未満の場合は、テンプレートを希釈して再度テストを実行する必要があります。Ct 値が 30 ～ 35 の場合、増幅効率を向上させ、結果解析の精度を確保するには、テンプレート濃度を増やすか、反応系の容積を増やす必要があります。Ct 値が 35 を超える場合、検査結果は遺伝子の発現を定量的に分析することはできませんが、定性分析には使用できます。

3.2 融解曲線:

融解曲線の単一ピークは、反応特異性が良好で定量分析が実行できることを示しています。融解曲線が二重または複数のピークを示す場合、定量分析は実行できません。融解曲線は二重ピークを示しており、目的外ピークがプライマーダイマーであるか非特異的増幅であるかをDNAアガロースゲル電気泳動により判断する必要がある。プライマーダイマーの場合は、プライマー濃度を下げるか、増幅効率の高いプライマーを再設計することをお勧めします。非特異的な増幅の場合は、アニーリング温度を上げるか、特異性を持ったプライマーを再設計してください。

ノート

健康と安全を確保するために、白衣や手袋などの必要な個人用保護具を着用してください。

この製品は研究専用です。