5×Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG

カタログ番号: HCB5142A

Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) は、ワンステップ逆転写および定量的 PCR (qRT-PCR) に適した、安定性の高いワンチューブのプローブベースのミックスです。プライマーとプローブの事前混合をサポートし、低温での長期保管後も安定性を保ちます。追加のチューブの開口/ピペッティング操作を必要とせず、使用時に検査対象のサンプルを直接添加できます。この製品には、ホットスタート DNA ポリメラーゼ、M-MLV、熱不安定性ウラシル DNA グリコシラーゼ (TS-UNG)、RNase 阻害剤、MgCl などのコンポーネントが含まれています。₂、dNTP（dTTPの代わりにdUTPを使用）、およびスタビライザー。遺伝子組み換えされた高速増幅逆転写酵素と DNA ポリメラーゼを使用すると、PCR 増幅を 20 ～ 40 分以内に完了することが可能です。この試薬は、抗阻害性増幅酵素とUNG酵素の混合酵素を含むqPCR用の特殊な緩衝液を使用しています。したがって、標的遺伝子の良好な増幅が得られ、PCR残留物やエアロゾル汚染による誤った増幅を防ぐことができます。この試薬は、Applied Biosystems、Eppendorf、Bio-Rad、Roche などのメーカーのほとんどの蛍光定量 PCR 装置と互換性があります。

成分

1.25×Neoscript Fast RTase/UNG ミックス

2.5×Neoscript 高速 RT プレミックス バッファー (dUTP)

保管条件

すべてのコンポーネントは、長期保管の場合は -20℃、最長 3 か月の場合は 4℃ で保管してください。解凍後よく混ぜ、遠心分離してからご使用ください。頻繁な凍結融解は避けてください。

qRT-PCR反応系の準備

1) a. プライマーの最終濃度は通常 0.2μM です。より良い結果を得るには、プライマー濃度を 0.2 ～ 1 μM の範囲内で最適化できます。一般に、プローブ濃度は 0.1 ～ 0.3 μM の範囲内で最適化できます。

2) b.高速 PCR 手順を使用する場合、プライマーとプローブの濃度を高めるとより良い増幅結果が得られる可能性があるため、それらの比率をそれに応じて最適化する必要があります。

3) サンプルの種類が異なれば、阻害剤の種類や含有量、標的遺伝子のコピー数も異なります。サンプル量は実際の状況に応じて考慮してください。必要に応じて、ヌクレアーゼフリーの水または TE バッファーでサンプルを希釈します。

反応C条件

品質管理

1。機能検出: qPCR の感度、特異性、再現性。

2.外因性ヌクレアーゼ活性なし: 外因性エンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼ汚染はありません。

ノート

1.高速DNAポリメラーゼの増幅速度は1kb/10s以上です。PCR 装置が異なれば、加熱および冷却速度、温度制御モード、熱伝導率も異なるため、特定の高速 PCR 装置と組み合わせたプライマー/プローブ濃度および実行方法の最適化が不可欠です。

2.本製品は応用範囲が広く、高感度な分子診断に適しています。アニーリング温度が低いプライマー、または 200 bp を超える長いフラグメントの増幅には、3 ステップ PCR 法が推奨されます。

3.アンプリコンごとにdUTPの利用効率やUNGに対する感度が異なるため、UNGシステム使用時に検出感度が低下する場合には試薬を最適化する必要があります。技術サポートが必要な場合は、お問い合わせください。

4.キャリーオーバー PCR 産物の増幅を避けるために、増幅には専用の実験エリアとピペットが必要です。手袋を着用して操作し、頻繁に交換し、増幅後に PCR チューブを開けないでください。