BspQI
BspQI は、特定の部位を認識できる大腸菌で組換え発現することができ、以下の方法で生産されます。
IIs 制限エンドヌクレアーゼ制限エンドヌクレアーゼである BspQI は、Bacillus sphaericus からクローン化および修飾された BspQI 遺伝子を保有する組換え大腸菌株に由来します。特定の部位を認識することができ、認識配列と切断部位は以下の通りです。
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
製品の特徴
1. 高活性、速い消化;
2. 星の活動が低く、「メス」のような正確な切断を保証します。
3. BSA を含まず、動物由来成分を含まない。
メチル化感受性
Dメチル化されています:敏感ではありません。
Dcmメチル化:敏感ではありません。
CpGメチル化:敏感ではありません。
保管条件
製品は0℃以下で出荷する必要があります。-25～-15℃の環境で保管してください。
ストレージバッファ
20mM Tris-HCl、0.1mM EDTA、500mM KCl、1.0mM ジチオスレイトール、500μg/ml 組換えアルブミン、0.1% Trition X-100、および 50% グリセロール (pH 7.0 @ 25°C)。
単位の定義
1 ユニットは、総反応量 50 µL 中、50℃、1 時間で 1 µg の内部コントロール DNA を消化するのに必要な酵素の量として定義されます。
品質管理
タンパク質純度アッセイ (SDS-PAGE):BspQI の純度は SDS-PAGE 分析により 95% 以上と測定されました。
RNase:10UのBspQIと1.6μgのMS2 RNAを50℃で4時間処理しても、アガロースゲル電気泳動で測定されたように分解はありません。
非特異的 DNase 活性:10UのBspQIと1μgのλ DNAを50℃で16時間処理した場合、50℃で1時間処理した場合と比較して、アガロースゲル電気泳動で過剰なDNAは生成しませんでした。
結紮と再切断:1μgのλDNAを10U BspQIで消化した後、DNA断片をT4 DNAリガーゼを用いて16℃でライゲーションできます。そして、これらの連結された断片は BspQI で再切断できます。
大腸菌 DNA: 大腸菌 16s rDNA 特異的 TaqMan qPCR 検出により、大腸菌ゲノム残基 ≤ 0.1pg/ul が示されました。
宿主タンパク質残基:≤ 50ppm
細菌性 エンドトキシン: 中国薬局方 IV 2020 版、ゲル限界試験方法、一般規則 (1143) による LAL テスト。細菌のエンドトキシン含有量は 10 EU/mg 以下である必要があります。
反応系と反応条件
| 成分 | 音量 |
| BspQ I(10U/μL) | 1μL |
| DNA | 1μg |
| 10×BspQ Iバッファ | 5μL |
| ddH2O | 50μLまで |
反応条件：50℃, 1~16時間。
加熱失活：80℃ 20分間
推奨される反応系と条件は比較的良好な酵素消化効果をもたらしますが、これは参考のみです。詳細については実験結果を参照してください。
製品の用途
制限エンドヌクレアーゼ消化、迅速なクローニング。
ノート
1. 酵素量 ≤ 反応量の 1/10。
2. グリセロール濃度が 5% を超えるとスター活性が発生する可能性があります。
3. 基質が推奨比率を下回っている場合、切断活性が発生する可能性があります。
