マルチプレックス qPCR プローブ プレミックス
カタログ番号: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) は、青色でサンプル添加効果のある、高い感度と特異性を特徴とする 2 × リアルタイム定量 PCR 増幅用のプレソリューションです。この製品は、単一の反応ウェルで最大 4 つの蛍光定量 PCR 反応を可能にする 2x Mix プレミックス試薬です。この製品には、ホットスタート Taq 酵素に対する遺伝子組み換え抗体メソッドが含まれており、増幅の感度と特異性が大幅に向上しています。同時に、この製品はマルチリアクションバッファーを徹底的に最適化しているため、反応の増幅効率が向上し、低濃度のテンプレートの効果的な増幅を促進できます。この製品は、ジェノタイピングおよび多重定量分析に使用できます。
仕様
ホットスタート | ホットスタート内蔵 |
検出方法 | プライマープローブの検出 |
PCR法 | qPCR |
ポリメラーゼ | Taq DNA ポリメラーゼ |
サンプルの種類 | DNA |
保管条件
ドライアイスを同封して出荷し、-25〜-15℃で2年間保存可能です。
説明書
1. 反応システム
コンポーネント | 体積(μL) | 最終濃度 |
2× TaqMan マルチプレックス qPCR マスター ミックス | 12.5 | 1× |
プライマーミックス(10μmol/L) a | × | 0.1~0.5μmol/L |
プローブミックス(10μmol/L)b | × | 50~250nmol/L |
Rox 参照色素 | 0.5 | 1× |
テンプレートDNA/cDNA | 1-10 | - |
ああ2O | 25まで | - |
ノート:激しく振って過剰な泡が発生しないように、使用前に十分に混合してください。
a.プライマー濃度: プライマー ミックスには複数のプライマー ペアが含まれており、通常、各プライマーの最終濃度は 0.2 μmol/L ですが、必要に応じて 0.1 ~ 0.5 μmol/L の間で調整することもできます。
b.プローブ濃度: プローブ ミックスには、異なる蛍光シグナルを持つ複数のプローブが含まれており、各プローブの濃度は特定の状況に応じて 50 ~ 250 nmol/L の間で調整できます。
1.Rox 色素リファレンス:Applied Biosystems などのリアルタイム PCR 増幅装置で、ウェル間で生成される蛍光シグナルの誤差を補正するために使用されます。この製品には Rox 染料リファレンスは含まれていません。必要に応じて Cas#10200 をお勧めします。
2.テンプレートの希釈: qPCR は感度が高いため、テンプレートを希釈して使用することをお勧めします。テンプレートが cDNA ストック溶液である場合、テンプレートの量は総量の 1/10 を超えてはなりません。
3.反応系: 標的遺伝子増幅の有効性と再現性を確保するには、25μL、30μL、または50μLを推奨します。
4.システムの準備: スーパークリーンベンチ内で準備し、ヌクレアーゼ残渣のないチップと反応チューブを使用してください。フィルターカートリッジを備えたチップを使用することをお勧めします。相互汚染やエアロゾル汚染を避けてください。
2.リアクションプログラム
サイクルステップ | 温度. | 時間 | サイクル |
初期変性 | 95℃ | 5分 | 1 |
変性 | 95℃ | 15秒 | 45 |
アニーリング/エクステンション | 60℃ | 30秒 |
ノート:
1。アニーリング・伸長:設計したプライマーのTm値に応じて温度と時間を適宜調整することができる。
2.蛍光シグナル取得: qPCR 検出装置によって必要な蛍光シグナル取得時間は異なります。最小制限時間に従って設定してください。いくつかの一般的な機器の時間は次のように設定されます。
20 秒: Applied Biosystems 7700、7900HT、7500 Fast
31 秒: アプライド バイオシステムズ 7300
32 秒: アプライド バイオシステムズ 7500
ノート
健康と安全を確保するために、白衣や手袋などの必要な個人用保護具を着用してください。