UDG/UNG酵素
UDG（ウラシル DNA グリコシラーゼ）は、ssDNA および dsDNA のウラシル塩基と糖リン酸骨格の間の N-グリコシド結合の加水分解を触媒します。エアロゾル汚染を簡単に制御でき、PCR、qPCR、RT-qPCR、LAMP などの一般的な分子生物学システムに適しています。
仕様
| 式ホスト | ウラシル DNA グリコシラーゼ遺伝子を持つ組換え大腸菌 |
| 分子量 | 24. 8kDa |
| 純度 | ≥95% (SDS-PAGE) |
| 熱不活化 | 95℃、5～10分 |
| 単位の定義 | 1 ユニット (U) は、25℃、30 分間で 1 μg dU 含有 dsDNA の加水分解を触媒するのに必要な酵素の量として定義されます。 |
ストレージ
-25℃～-15℃で2年間保存してください。
説明書
1.以下のシステムによるPCR反応液の調製
| コンポーネント | 体積(μL) | 最終濃度 |
| 10×PCR バッファー (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25mmol/LMgCl | 3 | 1.5ミリモル/L |
| dUTP(10mmol/L) | 3 | 0.6ミリモル/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/リーチ) | 1 | 0.2 mmol/浸出 |
| テンプレートDNA | X | - |
| プライマー1 (10μmol/L) | 2 | 0.4μmol/L |
| プライマー2 (10μmol/L) | 2 | 0.4μmol/L |
| Taq DNA ポリメラーゼ (5 U/μL) | 0.5 | 0.05U/μL |
| ウラシル DNA グリコシラーゼ (UDG/UNG)、1 U/μL | 1 | 1U/μL |
| ddH₂O | 50まで | - |
注記： 実験要件に応じて、dUTP の最終濃度は 0.2 ～ 0.6 mmol/L の間で調整でき、0.2 mmol/L の dTTP を選択的に添加できます。
2.増幅手順
| サイクルステップ | 温度 | 時間 | サイクル |
| dUを含むテンプレートの劣化 | 25℃ | 10分 | 1 |
| UDGの活性化、テンプレートの初期変性 | 95℃ | 5~10分 | 1 |
| 変性 | 95℃ | 10秒 |
30-35 |
| アニーリング | 60℃ | 20秒 | |
| 拡大 | 72℃ | 30秒/kb | |
| 最終延長 | 72℃ | 5分 | 1 |
注記： 25℃での反応時間は、実験要件に応じて5～10分以内に調整できます。
ノート
1.UDG はほとんどの PCR 反応バッファーで活性です。
2.酵素は使用時はアイスボックスまたは氷浴上で保管し、使用後は直ちに-20℃で保管してください。
3.健康と安全を確保するために、白衣や手袋などの必要な個人用保護具を着用してください。
