2×HiF Taqプラスマスターミックス
カタログ番号: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (色素あり) は、Plus HIF DNA ポリメラーゼ、dNTP、および最適化されたバッファーを含む、すぐに使用できる 2 倍のプレミックス ソリューションです。ポリメラーゼ活性と 3'→5'エキソヌクレアーゼ活性を阻害する 2 つのモノクローナル抗体を室温でマスター ミックスに添加すると、簡単かつ特異性の高い Hot Start PCR が可能になります。伸長因子はマスターミックスに添加され、酵素に長い断片の増幅能力を与えます。増幅の長さは最大 13 kb であり、酵素は 5'→3' DNA ポリメラーゼ活性と 3'→5' DNA ポリメラーゼ活性を備えています。エキソヌクレアーゼ活性の忠実度は Taq DNA ポリメラーゼの 83 倍、通常の DNA ポリメラーゼの 9 倍です。複雑なテンプレートの増幅に適しており、増幅産物は平滑末端です。
2×HIF Taq plus Master Mix(With Dye)は、迅速かつ簡単、高感度、強い特異性、優れた安定性などの利点を持ち、反応系はプライマーとテンプレートを追加するだけでよく、2つの増幅器で増幅できます。ステッププロトコルにより、実験ステップが簡素化され、時間を節約できます。この製品には電気泳動指示薬が含まれており、PCR 産物を直接電気泳動に使用できます。さらに、この製品には特定の保護剤も含まれているため、マスターミックスは凍結融解を繰り返しても安定した活性を維持できます。
保管条件
製品は-25〜-15℃で1年間保存してください。
仕様
製品仕様書 | マスターミックス |
集中 | 2× |
ホットスタート | 内蔵ホットスタート |
オーバーハング | 鈍い |
反応速度 | 急速な |
サイズ(完成品) | 13kbまで |
輸送条件 | ドライアイス |
製品の種類 | 高忠実度の PCR プレミックス |
説明書
1.PCR反応装置
コンポーネント | 体積(μL) |
DNAテンプレート | 適切な |
フォワードプライマー(10μmol/L) | 2.5 |
リバースプライマー(10μmol/L) | 2.5 |
2×HIF Taqプラスマスターミックス | 25 |
ああ2O | 50まで |
2.さまざまなテンプレートの推奨使用法
テンプレートの種類 | 1 kb から 10 kb までのフラグメントを増幅 |
ゲノムDNA | 50ng~200ng |
プラスミドまたはウイルス DNA | 10pg-20ng |
cDNA | 1-2.5 µL (最終 PCR 反応量の 10% を超えないようにしてください) |
3.増幅プロトコル
1) 2 ステップ プロトコル (複雑さのテンプレート)
サイクルステップ | 温度 | 時間 | サイクル |
初期変性 | 98℃ | 3分 | 1 |
変性 | 98℃ | 10秒 | 30-35 |
拡大 | 68℃ | 30秒/kb | |
最終延長 | 72℃ | 5分 | 1 |
2) スリーステッププロトコル(通常のプロトコル)
サイクルステップ | 温度 | 時間 | サイクル |
初期変性 | 98℃ | 3分 | 1 |
変性 | 98℃ | 10秒 | 30-35 |
アニーリング | 60℃ | 20秒 | |
拡大 | 72℃ | 30秒/kb | |
最終延長 | 72℃ | 5分 | 1 |
3) アニーリング勾配プロトコル (複雑さのテンプレート)
サイクルステップ | 温度 | 時間 | サイクル |
初期変性 | 98℃ | 3分 | 1 |
変性 | 98℃ | 10秒 | 15(1サイクルあたり1℃低下) |
勾配アニーリング | 70~55℃ | 20秒 | |
拡大 | 72℃ | 30秒/kb | |
変性 | 98℃ | 10秒 |
20 |
アニーリング | 55℃ | 20秒 | |
拡大 | 72℃ | 30秒/kb | |
最終延長 | 72℃ | 5分 | 1 |
異なる増幅プロトコルでの特徴
プロトコl | 2ステップ | 3ステップ | 勾配アニーリング |
仕様 | 速い | 中くらい | 遅い |
特異性 | 高い | 中くらい | 高い |
PCR収量 | 中くらい | 高い | 中くらい |
検出率 | 高い | 中くらい | 高い |
ノート
健康と安全を確保するために、白衣や手袋などの必要な個人用保護具を着用してください。