ホットスタート Taq DNA ポリメラーゼ
Hot Start Taq DNA ポリメラーゼ (抗体修飾) は、5'→3' ポリメラーゼ活性と 5' フラップ エンドヌクレアーゼ活性を有する Thermus aquaticus YT-1 由来のホットスタート熱安定性 DNA ポリメラーゼです。ホットスタート Taq DNA ポリメラーゼは、熱不安定性 Taq 抗体によって修飾された Taq DNA ポリメラーゼです。抗体修飾により、PCR の特異性、感度、収率が向上しました。
コンポーネント
| 成分 | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taqバッファー | 4×1mL | 4×10mL | 50mL×4 | 400mL×5本 |
| ホットスタート Taq DNA ポリメラーゼ (抗体修飾) (5 U/μL) | 0.1mL | 1mL | 5mL | 10×5mL |
アプリケーション
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 at 25℃)、100 mM KCl、0.1 mM EDTA、1 mM ジチオスレイトール、0.5% Tween20、0.5% IGEPALCA-630、および 50% グリセロール。
保存条件
輸送は0℃以下、保管は-25℃～-15℃で行ってください。
単位の定義
1単位は、75℃で30分間に15 nmolのdNTPを酸不溶性物質に取り込む酵素の量として定義されます。
品質管理
1.Endオンヌクレアーゼ活性:２０Ｕの酵素を４μｇのｐＵＣ１９ ＤＮＡと３７℃で４時間インキュベートしても、ゲル電気泳動で測定したところＤＮＡの分解は検出されなかった。
2.5 kb ラムダ PCR:200 μM dNTP および 0.2 μM プライマーの存在下で 1.25 ユニットの Taq DNA ポリメラーゼを使用した 5 ng ラムダ DNA の 25 サイクルの PCR 増幅により、予想される 5 kb の産物が得られます。
3.エキソヌクレアーゼ活性:最低 12.5 U の Taq DNA ポリメラーゼを含む 50 µl の反応液を 10 nmol の 5'-FAM オリゴヌクレオチドと 37℃ で 30 分間インキュベートしても、検出可能な分解は生じません。
4.RNase活性:20 U の酵素を含む 10 μL の反応液を 1 μg の RNA 転写物と 37℃ で 2 時間インキュベートしたところ、ゲル電気泳動で確認されたように RNA の分解は検出されませんでした。
5.熱による不活性化:いいえ。
反応システム
| コンポーネント | 音量 |
| テンプレートDNAa | オプション |
| 10 μM フォワードプライマー | 0.5μL |
| 10μM リバースプライマー | 0.5μL |
| dNTP ミックス (各 10mM) | 0.5μL |
| 5×HC Taqバッファー | 5μL |
| Taq DNA ポリメラーゼb(5U/μL) | 0.125μL |
| ヌクレアーゼフリー水 | 25μLまで |
ノート：
1) a.
| DNA | 額 |
| ゲノム | 1ng～1μg |
| プラスミドまたはウイルス | 1ページ～1ng |
2) b.Taq DNA ポリメラーゼの最適濃度は、特殊なアプリケーションでは 5 ～ 50 ユニット/mL (0.1 ～ 0.5 ユニット/25 μL 反応) の範囲になります。
サーマルサイクリングプロトコル
PCR
| ステップ | 温度(℃) | 時間 | サイクル |
| 初期変性a | 95℃ | 1～3分 | - |
| 変性 | 95℃ | 15～30秒 | 30～35サイクル |
| アニーリングb | 45～68℃ | 15～60秒 | |
| 拡大 | 68℃ | 1kb/分 | |
| 最終延長 | 68℃ | 5分 | - |
ノート：
1) ほとんどの増幅には、95℃で 1 分間の初期変性で十分です。難しいテンプレートの場合は、95°C で 2 ～ 3 分間の長い変性を推奨します。コロニー PCR では、最初に 95°C で 5 分間の変性を行うことが推奨されます。
2) アニーリングステップは通常 15 ～ 60 秒です。アニーリング温度はプライマーペアのTmに基づき、通常は45～68℃です。
