RNase阻害剤
マウス RNase インヒビターは、大腸菌から発現および精製された組換えマウス RNase インヒビターです。非共有結合によって RNase A、B、または C に 1:1 の比率で結合し、それによって 3 つの酵素の活性を阻害し、RNA を分解から保護します。ただし、RNase 1、RNase T1、S1 Nuclease、RNase H、Aspergillus 由来の RNase に対しては効果がありません。マウス RNase 阻害剤は、RT-PCR、RT-qPCR、IVT mRNA によってテストされ、さまざまな市販の逆転写酵素、DNA ポリメラーゼ、RNA ポリメラーゼと互換性がありました。
ヒト RNase 阻害剤と比較して、マウス RNase 阻害剤には、阻害剤の不活化を引き起こす酸化に非常に敏感な 2 つのシステインが含まれていません。そのため、低濃度の DTT (1 mM 未満) でも安定します。この特徴により、高濃度の DTT が反応に悪影響を与える反応 (リアルタイム RT-PCR など) での使用に適しています。
Aアプリケーション
この製品は、RNA 分解を回避するために RNase 干渉が可能な次のようなあらゆる実験で広く使用できます。
1.cDNA第一鎖の合成、RT-PCR、RT-qPCRなど
2.インビトロ転写/翻訳中の分解からRNAを保護します(例、インビトロウイルス複製システム)。
3.RNA の分離および精製中の RNase 活性の阻害。
保管条件
-25～-15℃で保存可能、有効期限は2年間です。
ストレージバッファ
50 mM KCl、20 mM HEPES-KOH (pH 7.6、25 ℃)、8 mM DTT、50% グリセロール。
単位の定義
5ngのリボヌクレアーゼAの活性を50%阻害するのに必要なマウスRNase阻害剤の量を1単位(U)と定義した。
タンパク質の分子量
マウス RNase 阻害剤の分子量は 50 kDa です。
品質管理
エキソヌクレアーゼ 活動：
アガロースゲル電気泳動によると、40 U のマウス RNase インヒビターと 1 μg の λ -Hind III 消化 DNA を 37℃ で 16 時間処理しても分解は生じません。
エンドヌクレアーゼ活性:
アガロースゲル電気泳動によると、40 U のマウス RNase インヒビターと 1 μ g の λ DNA を 37℃ で 16 時間処理しても分解は生じません。
ニッキング 活動：
40UのマウスRNase阻害剤を1μgのpBR322とともに37℃で16時間処理しても、アガロースゲル電気泳動で測定されたように分解は生じません。
RNase 活動:
アガロースゲル電気泳動によると、40UのマウスRNase阻害剤を1.6μgのMS2 RNAとともに37℃で4時間処理しても分解は生じません。
E.大腸菌DNA:
大腸菌 16S rRNA 遺伝子座に特異的なプライマーを使用した TaqMan qPCR を使用して、40 U のマウス RNase 阻害剤を大腸菌ゲノム DNA の存在についてスクリーニングします。大腸菌ゲノム DNA の混入は 0.1 pg/40 U 以下です。
N大手s
1.激しい振動や撹拌は酵素を失活させます。
2.本阻害剤の至適温度範囲は25～55℃であり、65℃以上で失活する。
3.RNase H、RNase 1、RNase T1 の活性はマウス RNase 阻害剤によって阻害されませんでした。
4. RNase 活性の阻害は幅広い pH で見られ (pH 5 ～ 9 はすべて活性)、最も高い活性は pH 7 ～ 8 で観察されました。
5.リボヌクレアーゼは通常、変性条件下で活性を保持するため、リボヌクレアーゼと複合体を形成したRNase阻害剤分子の変性を避けるように注意する必要があります。活性なリボヌクレアーゼの放出を防ぐために、50 °C を超える温度や高濃度の尿素またはその他の変性剤の使用は避けてください。
