ワンステップ RT-qPCR SYBR グリーン プレミックス
カタログ番号: HCB5140A
ワンステップ RT-qPCR Syber Green Premix は、SYBR Green I 色素に基づく蛍光定量用です。遺伝子特異的プライマーを使用すると、逆転写反応と qPCR 反応が 1 つのチューブで完了するため、キャップを開けたりピペットで操作したりする操作を繰り返し行う必要がなくなり、アッセイ効率が大幅に向上し、汚染のリスクが軽減されます。RNA サンプルの場合、このキットは効率的な cDNA 合成のために耐熱性逆転写酵素を使用し、定量的増幅のために HotStart Taq DNA ポリメラーゼを使用します。最適化されたバッファーシステムの下では、キットの感度は、高度に発現されたターゲットに対しては 0.1 pg まで、中程度に発現されたターゲットに対しては 1 pg まで高くなります。このキットは、DNA サンプルの増幅と定量に適しています。これにより、さまざまな動植物のサンプル、細胞、微生物からの核酸の高感度な検出と定量が可能になります。
コンポーネント
| No | 名前 | 音量 | 音量 |
| 1 | アドバンストバッファ | 250μL | 2×1.25mL |
| 2 | 高度な酵素ミックス | 20μL | 200μL |
| 3 | RNase フリー H2O | 250μL | 2×1.25mL |
保管条件
この製品は、光を避けて-25〜-15℃で1年間保管してください。
説明書
1.反応系の構成d
| コンポーネント | 体積(μL) | 体積(μL) | 最終濃度 |
| アドバンストバッファ | 12.5 | 25 | 1× |
| 高度な酵素ミックス | 1 | 2 | - |
| フォワードプライマー (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0.2μmol/L |
| リバースプライマー（10μmol/L）a | 0.5 | 1 | 0.2μmol/L |
| RNAタンプレートb | X | X | - |
| RNase フリー H2○c | 25まで | 50まで | - |
ノート：
1) a.T最終プライマー濃度は 0.2 μmol/L でしたが、必要に応じて 0.1 ～ 1 μmol/L の間で調整することもできました。
2) b.この試薬は非常に感度が高く、Total RNA は 1 pg ～ 1 μg の範囲にあり、ヒトサンプルのテストでは 1 pg ～ 100 ng の最適投入量が示され、全体の Ct 値を必要に応じて 15 ～ 30 の範囲に制御します。
3) c.標的遺伝子増幅の有効性と再現性を確保するには、20μL または 50μL を使用することをお勧めします。
4) d.ウルトラクリーンベンチで準備し、ヌクレアーゼ残留物のないチップと反応チューブを使用してください。フィルターカートリッジ付きのチップを推奨します。相互汚染やエアロゾル汚染を避けてください。
2.リアクションプログラム
| サイクルステップ | 温度 | 時間 | サイクル |
| 逆転写 | 50℃a | 6分 | 1 |
| 初期変性 | 95℃ | 5分 | 1 |
| 増幅反応 | 95℃ | 15秒 | 40 |
| 60℃b | 30秒 | ||
| 融解曲線段階 | 機器のデフォルト | 1 | |
ノート：
1) a.逆転写温度は実験のニーズに応じて50～55℃の間で選択できます。DNA サンプルの場合は、逆転写プロセスを省略できます。
2) b.特殊な場合には、アニーリング/伸長温度はプライマーの Tm 値に応じて調整できますが、60°C が推奨されます。
ノート
1. この製品は研究専用です。
2. 安全のため、白衣と使い捨て手袋を着用して作業してください。
