野生 Taq DNA ポリメラーゼ

コンポーネント

保存条件

輸送は0℃以下、保管は-25℃～-15℃で行ってください。

単位の定義

1単位は、75℃で30分間に15 nmolのdNTPを酸不溶性物質に取り込む酵素の量として定義されます。

品質管理

1.タンパク質純度アッセイ (SDS-PAGE):Taq DNA ポリメラーゼの純度は、SDS-PAGE 分析により 95% 以上と測定されました。

2.Endオンヌクレアーゼ活性:最低 5 U の Taq DNA ポリメラーゼと 1 μg の λDNA を 37 ℃ で 16 時間処理しても、検出可能な分解は生じません。

3.エキソヌクレアーゼ活性:最低 5 U の Taq DNA ポリメラーゼと 1 μg の λ -Hind Ⅲ 消化 DNA を 37 ℃ で 16 時間処理しても、検出可能な分解は生じません。

4.ニッカーゼ活性:最低 5 U の Taq DNA ポリメラーゼと 1 μg pBR322 DNA を 37℃で 16 時間処理しても、検出可能な分解は生じません。

5.RNase活性:最低 5 U の Taq DNA ポリメラーゼと 1.6 μg MS2 RNA を 37℃で 16 時間処理しても、検出可能な分解は生じません。

6.大腸菌DNA:大腸菌 16S rRNA 遺伝子座に特異的なプライマーを使用した TaqMan qPCR を使用して、5 U の Taq DNA ポリメラーゼを大腸菌ゲノム DNA の存在についてスクリーニングします。大腸菌ゲノム DNA の混入は 1 コピー以下です。

7.PCR 増幅 (5.0 kb ラムダ DNA)- 5 ng Lambda DNA と 5 ユニットの Taq DNA ポリメラーゼを含む 50 µL 反応で 25 サイクルの PCR 増幅を行うと、予想される 5.0 kb の産物が得られます。

反応のセットアップ

ノート：

1) テンプレートが異なると最適な反応濃度が異なります。次の表は、50 µL 反応システムの推奨テンプレート使用量を示しています。

2) 特殊な用途では、Taq DNA ポリメラーゼの最適濃度は 0.25 μL ～ 1 μL の範囲になります。

反応プログラム

ノート：

1) 初期変性条件はほとんどの増幅反応に適しており、テンプレート構造の複雑さに応じて変更できます。テンプレート構造が複雑な場合は、初期変性効果を向上させるために、前変性時間を 5 ～ 10 分に延長することができます。

2) アニーリング温度はプライマーの Tm 値に応じて調整する必要があり、一般にプライマーの Tm 値より 3 ～ 5 ℃低く設定されます。複雑なテンプレートの場合、効率的な増幅を達成するには、アニーリング温度を調整し、伸長時間を延長する必要があります。