スーパースタート qPCR プレミックス プラス UNG
カタログ番号: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG は、プローブベースの検出を使用したリアルタイム PCR の定性および定量反応用に設計された特殊な試薬で、凍結乾燥プロセス用に特別に開発されました。Taq酵素活性を室温で封止した新規ホットスタート酵素Hotstart Taq plus(DG)を配合しており、低温条件下でのプライマー非特異的アニーリングやプライマーダイマー形成による非特異的増幅を効果的に抑制し、改善効果を発揮します。増幅反応の特異性。この試薬は、最適化された qPCR 特異的バッファーと UNG/dUTP 汚染防止システムを使用して迅速なホットスタートを実現し、qPCR 反応の効率と感度を大幅に向上させます。幅広い定量領域で良好な標準曲線を取得し、定量を正確に実行できるため、PCR 産物の残留やエアロゾル汚染による偽陽性増幅を効果的に防止できます。この試薬は、Applied Biosystems、Eppendorf、Bio-Rad、Roche などのメーカーのほとんどの蛍光定量 PCR 装置と互換性があり、凍結乾燥形態で良好な安定性を示します。
試薬組成
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg)2+無料)(DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×凍結保護剤(オプション)
保管条件
-20℃での長期保管。4℃で3ヶ月まで保存可能です。使用前によく混ぜてから、凍結と融解を繰り返すことは避けてください。
サイクリングプロトコル
手順 | 温度 | 時間 | サイクル |
消化 | 50℃ | 2分 | 1 |
ポリメラーゼの活性化 | 95℃ | 1~5分 | 1 |
変性 | 95℃ | 10~20秒 | 40-50 |
アニーリングと伸長 | 56~64℃ | 20~60秒 | 40-50 |
qPCR 液体反応 Sy茎の準備
構成 |
25μL容量 |
50μL容量 |
最終濃度 |
5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+無料)(DG) | 5μL | 10μL | 1× |
250mM MgCl2 | 0.45μL | 0.9μL | 4.5mM |
4×凍結保護剤1 | 6.25μL | 12.5μL | 1× |
25×プライマープローブミックス2 | 1μL | 2μL | 1× |
テンプレートDNA3 | —— | —— | —— |
ああ2O | 25μLまで | 50μLまで | —— |
1. 通常、プライマーの最終濃度 0.2μM で良好な結果が得られます。反応性能が悪い場合は、必要に応じてプライマー濃度を0.2~1μMの範囲で調整してください。プローブ濃度は通常、最適な組み合わせを見つけるための勾配実験を通じて 0.1 ~ 0.3 μM の範囲内で最適化されます。
2. 異なるタイプのテンプレートに含まれる標的遺伝子のコピー数は異なります。必要に応じて、勾配希釈を実行して最適なテンプレート添加量を決定できます。
3. このシステムは凍結乾燥できます。顧客が凍結乾燥要件なしでこのシステムを使用する場合、4×凍結保護剤を選択的に追加できます。凍結乾燥製品が必要な場合は、液体試薬段階の製品性能検証中に、凍結乾燥システム成分との一貫性を確保するために4×凍結保護剤を追加する必要があります。そして効果。
システム使用時d フリーズドライ用に、 システム as 続く:
構成 | 25μL 反応システム |
5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg)2+無料)(DG) | 5μL |
250mM MgCl2 | 0.45μL |
4×凍結保護剤 | 6.25μL |
25×プライマープローブミックス | 1μL |
ああ2O | 18~20μLまで |
※その他の凍結乾燥装置をご希望の場合は別途ご相談ください。
凍結乾燥プロセスss
手順 | 温度 | 時間 | 状態 | プレッシャー |
予備凍結 | 4℃ | 30分 | 所有 |
1気圧 |
-50℃ | 60分 | 冷却 | ||
-50℃ | 180分 | 所有 | ||
一次乾燥 | -30℃ | 60分 | 暖房 |
極限真空 |
-30℃ | 70分 | 所有 | ||
二次乾燥 | 25℃ | 60分 | 暖房 |
極限真空 |
25℃ | 300分 | 所有 |
2. 上記の凍結乾燥プロセスは参考用です。製品タイプや凍結乾燥機が異なればパラメータも異なるため、実際の条件に応じて調整が可能使用中の状態。
3. 異なるバッチサイズの凍結乾燥品には、異なる凍結乾燥プロセスが適している場合があります。したがって、大規模な生産に使用する場合は、十分なテスト検証を実行する必要があります。
凍結乾燥品の使用説明書dパウダー
1. 凍結乾燥粉末を簡単に遠心分離します。
2. 核酸テンプレートを凍結乾燥粉末に加え、水を最大 25μL まで加えます。
3. 遠心分離によりよく混合し、機械で実行します。
品質管理:
1. 機能検査: qPCR の感度、特異性、再現性。
2. 外因性ヌクレアーゼ活性がなく、外因性のエンド/エキソヌクレアーゼの汚染もありません。
技術的な案内:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG は、1 ~ 5 分以内の迅速なホットスタートを可能にする新しいホットスタート酵素を使用しています。特殊な緩衝液配合により、マルチプレックス蛍光定量 PCR 反応に適しています。
2. より高い特異性を有し、蛍光定量的 PCR 限界検出の感度を大幅に向上させ、増幅曲線の正規化を実現し、低濃度のテンプレートで蛍光値が明らかに向上し、高感度蛍光定量的 PCR 検出試薬として適しています。
3. アニーリング温度が低いプライマー、または 200 bp フラグメントを超えるプライマーの場合は、3 ステップ法をお勧めします。
4. dUTP の利用効率や UNG 酵素の感度は標的遺伝子ごとに異なるため、UNG システムを使用することで検出感度が低下する場合は、反応システムを調整して最適化する必要があります。技術サポートが必要な場合は、弊社までご連絡ください。
5. 増幅の前後に専用のエリアとピペットを使用し、操作中は手袋を着用し、頻繁に交換します。PCR 産物によるサンプルの汚染を最小限に抑えるため、PCR 完了後は反応チューブを開けないでください。