ウラシル DNA グリコシラーゼ
ウラシル DNA グリコシラーゼ (UNG または UDG) は、分子量 25 kDa の大腸菌の組換えクローンです。ウラシルを含む一本鎖および二本鎖 DNA からの遊離ウラシルの放出を触媒し、RNA に対して不活性であり、PCR 増幅産物の汚染を防ぐために使用できます。作用原理は、PCR反応においてdTTPがdUTPに置換され、dU塩基を含むPCR増幅産物が形成されると、酵素は一本鎖および二本鎖のU塩基のグリコシド結合を選択的に切断できるという事実に基づいています。 DNA を分解し、PCR 増幅産物を分解します。
推奨アプリケーション
汚染防止増幅
保存条件
長期保管の場合は -20°C で、使用前によく混合する必要があり、頻繁な凍結融解は避けてください。
ストレージバッファ
20 mM トリス-HCl (pH 8.0)、150 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM DTT、安定剤、50% グリセロール。
単位の定義
dU塩基を含む1μgの一本鎖DNAを37℃で1時間で分解するのに必要な酵素量は1ユニットです。
品質管理
1.98%を超えるSDS-PAGE電気泳動純度
2.増幅感度、バッチ間の制御、安定性
3.1UのUNGを50℃で2分間処理すると、103コピー未満のUを含むテンプレートは完全に分解され、増幅産物は生成されなくなります。
4.外因性ヌクレアーゼ活性なし
説明書
| コンポーネント | 体積(μL) | 最終濃度 |
| 10 × PCR バッファー (dNTP フリー、Mg²+無料） | 5 | 1× |
| dUTP（dCTP、dGTP、dATP） | - | 200μM |
| dUTP (dTTP を置き換え) | - | 200-600μM |
| 25 mM MgCl2 | 2～8μL | 1～4mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25U |
| 5U/μL UNG | 0.25（0.1～0.5） | 0.25U(0.1～0.5) |
| 25 × プライマーミックスある | 2 | 1× |
| テンプレート | - | ＜1μg/反応 |
| ddH₂O | 50まで | - |
注記： a: qPCR/qRT-PCRに使用する場合、蛍光プローブを反応系に添加する必要があります。通常、最終プライマー濃度 0.2 μM で良好な結果が得られます。反応性能が悪い場合は、プライマー濃度を0.2～1μMの範囲で調整できます。通常、プローブ濃度は 0.1 ～ 0.3 μM の範囲で最適化されます。濃度勾配実験を実行して、プライマーとプローブの最適な組み合わせを見つけることができます。
ノート
1.UNG 酵素を使用すると、PCR 増幅反応の前に反応系から汚染された dUTP 増幅産物を除去し、産物の汚染による偽陽性結果を回避できます。
2.アンチコンタミネーション PCR 反応に使用する UNG 酵素の最適温度は、一般に 50℃、2 分間です。不活化条件は95℃、5分間です。
3.頻繁な凍結融解を避け、大きな温度変動にさらさないでください。
4.増幅する遺伝子によってdUTPの利用効率やUNG酵素の感度が異なるため、UNGシステムの使用により検出感度が低下する場合は、反応システムを調整して最適化する必要があります。技術サポートが必要な場合は、お問い合わせください。当社。
